液相色譜出現“雙峰”如何處理？

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有些用戶在使用液相色譜柱時，由于對樣品不了解或者處理不當，分析方法不合理，導致峰形異常，數據不準確，其中“雙峰”就是最常見的問題。如果出現“雙峰”，該如何處理呢？

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什么是“雙峰”？

“雙峰”現象就是液相色譜中最常見的問題之一，明明是同一種物質，但在色譜圖中卻呈現2個峰值，實驗人員會誤認為有兩種物質。

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為何會出現“雙峰”

出現色譜“雙峰”的原因一般有以下幾種：

一、色譜柱本身的問題

如果樣品分析時發現每個色譜圖都有“雙峰”，尤其在分析單一純物質時，那么基本可以斷定色譜柱時出現問題了，受污染或者受損是最常見的，一般是柱頭原因，被堵住或者污染了。

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一般如果如果進樣量少，原來色譜柱正常，形狀多為一大峰帶一小峰，不一定拖尾，這種情況可以判斷為柱頭受堵。解決方案是將色譜柱反過來接，用流動相沖洗或酸洗或其它溶劑沖洗堵在柱頭的殘留物。

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如果發生峰拖尾，并且“雙峰”強弱相差不大，就有可能是柱頭固定相變臟或流失。使用者可以將進樣頭擰開，將微孔濾片超聲，柱頭刮去一部分填料，重新填上新填料，不過這個不能經常用，容易損壞。

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如果不是以上原因，則可能是柱塌陷造成的，這是就需要更換色譜柱了。

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二、溶劑的問題

HPLC分析柱多為反相色譜，流動通常是甲醇、乙腈、水，加各種添加劑以改善分離性能。

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最常用的溶解方法是用流動相溶解。在實際使用過程中，為了增強樣品的溶解性或穩定性，會加入一些緩沖液，緩沖液中的酸堿性可能會導致樣品轉化，導致出現“雙峰”。

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可以通過更換緩沖液，調整溶劑pH值，用流動相配置樣品來解決這一問題。

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三、進樣量的問題

純甲醇、純乙腈，純乙醇這類溶劑極性強度大的試劑，可能會導致“雙峰”。

一般分析體系中以水為主，如果樣品進樣量大，單一的純物質可能會出現“雙峰”，一般第二峰比第一峰小。

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這是因為樣品的溶劑與流動相極性相差太大，流動相沒有及時將溶劑進行稀釋，這時此情需要減少進樣量。

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另外，進樣量如果過大，色譜柱過載，也會出現“雙峰”現象。

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四、樣品原因

不同的樣品化學結構不同，存在互變異構現象，而這種互變異構體無法分開，會以動態平衡狀態存在。

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色譜分析時，在特定的條件下，參數在一定范圍內，可能會出現“雙峰”，并且“雙峰”靠的很近，高度差不多，不拖尾，如果條件發生變化，尤其pH值變化，“雙峰”就會消失，如紅霉素等樣品就有這類情況。

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五、pH值

pH值對色譜“雙峰”的影響出現在分析中的每個環節上，尤其在緩沖液流動相平衡中。

當連續進樣時，受pH的連續變化影響，經常會出現“雙峰”的情況。

恒譜生建議使用者在進行樣品分析時，流動相的pH要盡量遠離被分析物的等電點，不然也可能導致“雙峰”產生。

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“雙峰”是液相色譜柱使用時經常出現的場景，了解其產生原因并及時處理，可以有效延長液相色譜柱使用壽命。

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